146例非免疫性水肿胎儿的产前染色体分析（二）

编者按：胎儿水肿包括免疫性胎儿水肿与非免疫性胎儿水肿，其中非免疫原因占胎儿水肿原因的85%以上，发病率约为3/10000。本文选取146例非免疫性水肿胎儿，通过经腹绒毛取样、羊膜腔穿刺、脐静脉穿刺及流产后取胎儿组织送检的方法进行胎儿染色体核型及低覆盖度大规模平行测序技术（CNV-seq）的分析。分析非免疫性水肿胎儿的产前诊断结果，明确其染色体异常的类型。本文分为多个部分，点击系列文章列表阅读全文。

1.2方法

1.2.1组织送检

(1)绒毛诊断:妊娠11~13+6周经腹活检取绒毛4～5mg；(2)羊水诊断:妊娠18~23+6周经腹羊膜腔穿刺取羊水30ml；(3)脐血诊断:妊娠24周后经腹脐静脉穿刺取血2ml；(4)胎儿组织送检:死胎流产后取胎儿皮肤组织0.5cm3。既往研究显示，CNV-Seq与微阵列技术有较好的一致性，且CNV-Seq需要样本量较小，适用于取样量较小的绒毛标本，因此本研究采用CNV-seq作为CNVs的检测方法。绒毛及胎儿组织标本送检CNV-Seq，羊水及脐血标本除CNV-Seq外还送检核型。介入性产前诊断均在超声定位下进行，按常规方法进行细胞培养、收获、制片及核型分析。孕妇术前常规遗传咨询并签署知情同意书。羊水穿刺、脐带血穿刺及绒毛穿刺均由本院产前诊断中心完成，送检单位为本院遗传实验室。CNV-seq检测外送至贝瑞和康公司。

1.2.2CNV-Seq

将50ng基因组DNA进行片段化处理，获得平均大小为300bp的DNA片段，参考文献构建测序文库[9-10]，使用Illumina公司的HiSeq2000平台进行测序，36bp单端测序，测序深度0.1倍，产生800万条测序序列。使用Burrows-Wheeler算法将所有测序序列与hg19基因组进行比对分析[11]。根据文献记载的数据处理和分析算法[12]，将最少20个测试样本进行内部比较，互相作为参考。为了提高检测灵敏度，以60kb为基本测序单元，对约500万条测序序列进行分析。以标准化测序读取密度的log2值为y轴，以相对连续的60kb测序单元为x轴，绘制CNV-seq检测结果图。依据每条染色体的长度计算log2平均值。染色体拷贝数重复（3个拷贝）的log2理论值为log2[1.5]=0.58，染色体拷贝数缺失（1个拷贝）的log2理论值为log2[0.5]=-1.0。将CNV-seq检测拷贝数重复的cut-off值设为大于2.8（log2[1.4]=0.49），拷贝数缺失的cut-off值设为小于1.2（log2[0.6]=0.74）。

数据查询DGV、DECIPHER、OMIM、UCSC及PubMed公共数据库资源。致病性CNV根据美国医学遗传会与基因组学会（ACMG）诊断标准，将CNVs分为3大类5级：(1)致病性CNVs(pathologicalcopynumbervariations，pCNVs)；(2)良性CNVs；(3)临床意义未明的CNVs；(4)可能致病性CNVs；(5)可能良性CNVs[13]。

1.2.3数据收集

核对研究对象的一般情况、超声结果及遗传室结果并录入电脑，整理分析其临床信息。

1.3统计学处理

采用SPSS19.0软件，计数资料采用频数及率描述，率的比较采用卡方检验。P小于0.05为差异有统计学意义。

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结果

2.1一般情况

146例水肿胎儿的产前诊断方法包括绒毛穿刺57例，羊水穿刺68例，脐血穿刺11例，死胎流产后送检胎儿组织10例；孕周为11~33周，中位数孕周为15周。146例水肿胎儿的染色体异常发生率为48.6%（71/146），其中性染色体异常数量最多，为29例，21-三体19例，18三体13例，13-三体3例，其他染色体异常1例，致病性CNVs6例（表1）。其他染色体异常1例，系38岁孕妇，13周因胎儿水肿、颈部水囊瘤行绒毛穿刺，46，XN，del(5)(p15,33)。

2.2不同孕周水肿胎儿的染色体异常检出

水肿胎儿的染色体异常检出率随孕周的增加而显著降低，小于14孕周、14~27孕周、大于等于28孕周孕妇的染色体异常检出率分别为68.4%（39/57）、40.8%（31/76）和7.7%（1/13）（表1）。

作者：侯磊,王小新,李介岩,等

来源：现代妇产科进展

参考文献：