玻璃化冷冻和冻胚移植两种方法的累积妊娠率的比较

第3天新鲜胚胎移植，随后第3天vs第5/6天玻璃化冷冻和冻胚移植这两种方法的累积妊娠率的比较:一项随机对照试验。

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译者荐语

胚胎玻璃化冷冻，是利用高浓度的冷冻保存剂，在短时间内置换掉细胞内的水分，接着置于-196℃的液氮中迅速降温，使细胞内液体玻璃化，以此减少冰晶所造成的伤害。如今随着这一技术的进步，除了能减少在冷冻胚胎过程中可能受到的伤害，还能避免当周期植入胚胎相关的卵巢过度刺激综合征。若选择植入Day3的胚胎，可减少培养Day3至Day5/6的耗损，早日回到环境更为天然的子宫。但Day3的胚胎仍在分裂期，通常不只植入一颗，存在有多胞胎的潜在风险。若是植入Day5/6的囊胚，因胚胎能在体外培养至Day5/6，一般认为发育的潜力更好。那么玻璃化冷冻Day3和Day5/6移植之间的累计妊娠率、持续妊娠率是否有差异呢？本文对此进行了研究。

研究类型

随机对照试验

研究背景

与卵裂期(第3天)移植相比，继续胚胎培养和囊胚移植(第5/6天)后，经IVF或ICSI治疗的妊娠率和活产率更高。一个获卵(OR)周期的累积妊娠率在新鲜或冷冻胚胎移植后没有显著差异，但只有一项研究使用玻璃化冷冻保存多余胚胎，而其他四项研究使用慢速冷冻方案。

材料方法

数据来源及时间：2018年1月至2020年8月，在鲁汶大学招募志愿者。

纳排标准：①纳入标准：a.女性年龄小于38岁；b.非供卵；c.计划IVF/ICSI过程中进行一到两次取卵；d.FSH和AMH水平正常；②排除标准：a.计划进行PGT的患者；b.BMI大于30kg/m²；c.子宫内膜异位症III期或IV期患者。

分组：将患者随机化的分为两组，玻璃化冷冻第3天组（n=80）和玻璃化冷冻第5/6天组（n=81）。

研究方法：将纳入分析的患者随机分为两组，均在第3天进行新鲜胚胎移植，随后在Day3和Day5/6将多余的胚胎（细胞数大于等于6，破损率小于25%，卵裂球相等）或囊胚（扩张等级大于等于2，内细胞团和滋养外胚层评分A/B）玻璃化冷冻，然后移植。

以患者首次妊娠进行分析，将胚胎移植的数量作为时间组成部分，采用Cox比例风险模型进行统计学比较。利用Mann-WhitneyU试验，探讨第3天和第5/6天玻璃化的累积成本。

在第3天进行新鲜胚胎移植，根据发育和形态特征选择最佳胚胎。根据随机分组，在第3天(研究组:玻璃化第3天)或在第5/6天(研究组:玻璃化第5/6天)延长培养后冷冻保存足够质量的多余胚胎。

卵裂期(Day3)和囊胚期(Day5/6)胚胎的冻融过程：使用玻璃化冷冻试剂盒进行玻璃化过程。在复苏后，观察卵裂期胚胎卵裂球的数量、排列和破碎程度。只有囊胚完整度大于50%的囊胚才适合移植。如果囊胚严重(大于50%的细胞受损)或完全受损，则立即再复苏一个。只有当囊胚在复苏和转移之间没有出现进一步的损伤时，才可以进行移植。

冷冻胚胎移植周期：在自然FET周期中，卵裂期胚胎在扳机后第6天移植，囊胚在触发排卵后第7天移植。当在预定扳机日检测到自发性LH激增时，提前一天进行胚胎移植。激素替代FET周期中，在黄体酮给药后第5天移植卵裂期胚胎，黄体酮给药后第6天移植囊胚。

研究终点及定义公式

利用率定义：同一周期内每个受精卵细胞使用的胚胎数量(移植或冷冻保存)。

卵裂期胚胎定义：胚胎有6个细胞，有25%的碎片，在第3天卵裂球大小有25%的差异。

囊胚期胚胎定义：第5/6天可以移植的胚胎，具有明确的ICM(评分A或B)和TE(评分A或B)。

研究结果

本研究共有154名患者纳入分析，玻璃化冷冻Day3组和玻璃化冷冻Day5/6组各77例。两组分别为110和108个新鲜周期，受精方式相似。获取到的卵母细胞数(11.5±5.7vs12.3±6.7)，成熟卵母细胞数(9.7±5vs10.6±6.2)，受精卵母细胞数(6.9±3.9vs7.4±4.7)均无差异。

新鲜胚胎移植：在两组之间，鲜胚移植率相当（96/110,87.3%）vs（88/108,81.5%），冷冻保存的周期数（13/110,11.9%）vs（17/108,15.7%）和未冷冻保存的周期数（30/110,27.3%）vs（31/108,28.7%)无差异。玻璃化冷冻Day3组的胚胎利用率（58%）显著高于玻璃化第5/6天组（47.9%），P小于0.05。

冻胚移植：共有255个FET周期被纳入分析:玻璃化第3天组140个，玻璃化第5/6天组115个。两组间的冻胚移植率相当，玻璃化第3天组（137/140,97.9%）vs玻璃化第5/6天组（113/115,98.3%），但玻璃化冷冻第3天组比玻璃化冷冻第5/6天组进行了更多的双胚胎移植DET（27/137例,19.7%）vs（9/113例,8%），P＜0.05。总之，共复苏175个Day3胚胎和138个Day5/6囊胚，玻璃化第3天组胚胎存活率高于玻璃化第5/6天组（170/175,97.1%）vs（122/138,88.4%)；P小于0.05。

新鲜胚胎移植与冷冻胚胎移植的临床结局：截至2021年12月，玻璃化第3天组77名患者进行了233例移植（96例新鲜+137例冷冻），玻璃化第5/6天组77名患者进行了201例移植（88例新鲜+113例冷冻）。两个研究组均在第3天进行新鲜胚胎移植，玻璃化冷冻第3天组的鲜胚移植持续妊娠率（OPR）高于玻璃化第5/6天组（24.0%）vs（18.2%）。在囊胚期（玻璃化冷冻第5/6天组）进行FET的持续妊娠率高于卵裂期（玻璃化冷冻第3天组）（28/113,24.8%）vs（19/137,13.9%）；P小于0.05。

玻璃化冷冻第3天组8次移植后（1或2个周期）的累积持续妊娠率为57%，而玻璃化冷冻第5/6天组为58%。在玻璃化第3天组和第5/6天组中，胚胎移植直至怀孕的中位数分别为5次和4次。8次胚胎移植后的累积临床妊娠率（cCPR）在玻璃化第3天组为62%，而在玻璃化第5/6天组为59%。

讨论

生存分析未显示两组之间有明显差异（风险比[HR]1.25,95%CI0.82；1.92,P=0.30）。结果显示玻璃化冷冻第3天组和第5/6天组的累积妊娠率无显著差异。

尽管计算显示每个研究组只需要75名患者(β=0.87,α小于0.05)，但这个样本依然很少。此外，两组之间进行单胚胎和双胚胎移植的例数不同，这可能会影响结果。

成本分析是对一部分患者进行的，样本较少，因此是探索性的。成本分析显示，与玻璃化冷冻第5/6天组相比，玻璃化冷冻第3天组的成本略高，差异没有统计学意义，但是小样本量限制了结果的确定性。

郑州大学第三附属医院生殖医学科主治医师，医学硕士。毕业于山东大学临床医学七年制。擅长多种生殖内分泌常见疾病、多囊卵巢综合征、不孕症、子宫内膜异位症等疾病的诊治，熟练掌握人工授精、试管婴儿等助孕方式，具有扎实的生殖内分泌理论基础和丰富的临床经验，多次参加国内外学术会议进行交流学习。发表SCI及中文核心论文多篇。

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