免疫组化过程中,非特异性反应指的是非特异性染色,具体原因如下:
- 如果检查过程中使用的抗体过期,或者抗体效价不够,均会导致非特异性染色。
- DAB染色时间太长或者变质,在进行DAB的孵育时间扩张会造成背景非特异性染色。
- 存在内源性酶和生物素。
- 如果一次性染太多片子的时候,容易出现组织变干,会导致非特异性染色。
- 如果切片在缓冲液中修复液里面浸泡时间过长,会导致非特异性染色。
- 抗体浓度过高。
- 清洗不充分。针对这个问题清洗一定要充分,PBS液体一定要双蒸水新配,用之前再次测定pH值。
- 如果选择了不正确的封闭血清,也会导致出现非特异性染色影响检查的结果。